{"id":2667,"date":"2017-05-12T14:32:03","date_gmt":"2017-05-12T13:32:03","guid":{"rendered":"http:\/\/nyuz.elte.hu\/?p=2667"},"modified":"2017-05-12T14:32:44","modified_gmt":"2017-05-12T13:32:44","slug":"clarity","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/?p=2667","title":{"rendered":"CLARITY"},"content":{"rendered":"

A sz\u00f6vetek b\u00e1mulatos transzparenci\u00e1ja<\/p>\n

Ha nekem p\u00e1r \u00e9vvel ezel\u0151tt azt mondta volna valaki, hogy az agyba bele lehet l\u00e1tni, akkor azt v\u00e1laszoltam volna, hogy ez valamif\u00e9le tr\u00fckk vagy az illet\u0151 mag\u00e1t az X-men univerzumba k\u00e9pzeli. Persze mint sok helyen itt is a megfogalmaz\u00e1s a l\u00e9nyeg: van egy technika, aminek a seg\u00edts\u00e9g\u00e9vel az agyat \u00e1ttetsz\u0151v\u00e9 lehet tenni.<\/p>\n

\u00dagy gondolom, hogy a tudom\u00e1ny egyik legizgalmasabb \u00e9s legdinamikusabban fejl\u0151d\u0151 ter\u00fclete maga a m\u00f3dszertan. Ebbe tartoznak azok az elj\u00e1r\u00e1sok, amelyekkel sz\u00e1mos \u00faj ismeretre tesz szert a kutat\u00f3i t\u00e1rsadalom, s rajtuk kereszt\u00fcl k\u00f6zvetve b\u00e1rmelyik \u00e9rdekl\u0151d\u0151, laikus ember is. Nem besz\u00e9lve arr\u00f3l, hogy ha a tudom\u00e1nyos felfedez\u00e9sek nem r\u00f6vid t\u00f6rt\u00e9nelmi reperto\u00e1rj\u00e1ra gondolunk, azt l\u00e1thatjuk, hogy olykor a v\u00e9letlennek k\u00f6sz\u00f6nhet\u0151 egy forradalmi tan le\u00edr\u00e1sa vagy \u00e9pp a m\u00e1r megl\u00e9v\u0151 technik\u00e1k kombin\u00e1ci\u00f3ja, ami k\u00edv\u00fclr\u0151l n\u00e9zve illogikus is lehet. S ez ad egy j\u00f3val nagyobb teret az eg\u00e9sznek \u2013 nem felt\u00e9tlen\u00fcl egy j\u00f3l defini\u00e1lt logik\u00e1t k\u00f6vet. A most t\u00e1rgyal\u00e1sra ker\u00fcl\u0151 elj\u00e1r\u00e1s eset\u00e9ben a vez\u00e9relv az volt, hogy hogyan lehetne el\u00e9rni azt az \u00e1llapotot, hogy egy adott sejtpopul\u00e1ci\u00f3t in situ lehessen l\u00e1tni az agy sz\u00f6vet\u00e9ben. Nem \u00e1rulok el nagy titkot, ha azt mondom, hogy ez az elk\u00e9pzel\u00e9s megval\u00f3sult, s\u0151t, az alapgondolatot m\u00e1r egyre t\u00f6bb helyen alkalmazt\u00e1k \u00e9s fejlesztett\u00e9k tov\u00e1bb.<\/p>\n

\"\"<\/a>A\u00a0CLARITY seg\u00edt tiszt\u00e1bban l\u00e1tni az eddigi m\u00f3dszerekhez k\u00e9pest<\/p>\n

A felfedez\u00e9s \u00e9s koncepci\u00f3<\/strong><\/p>\n

Az els\u0151 szakirodalmi adatok a m\u00f3dszerr\u0151l \u00e9s annak haszn\u00e1r\u00f3l 2013-ban l\u00e1ttak napvil\u00e1got a Nature<\/em> nev\u0171 foly\u00f3irat has\u00e1bjain. T\u00f6bbek k\u00f6z\u00f6tt Dr. Kwanhung Chung<\/strong> \u00e9s Dr. Karl Deisseroth<\/strong> volt a k\u00e9t szellemi szerz\u0151, akik kidolgozt\u00e1k a met\u00f3dus koncepci\u00f3j\u00e1t a kaliforniai Stanford Egyetem Biom\u00e9rn\u00f6ki kar\u00e1n. Annak \u00e9rdek\u00e9ben, hogy nagy mennyis\u00e9g\u0171 inform\u00e1ci\u00f3t szerezz\u00fcnk meg egy \u00f6sszetett rendszerr\u0151l, mik\u00f6zben egy glob\u00e1lis perspekt\u00edv\u00e1t kell fenntartanunk sz\u00fcks\u00e9ges a rendszer m\u0171k\u00f6d\u00e9s\u00e9nek ismerete, ami egy kulcsfontoss\u00e1g\u00fa fogalom a biol\u00f3gi\u00e1ban. Chung \u00e9s munkat\u00e1rsai arra t\u00f6rekedtek, hogy erre a kih\u00edv\u00e1sra a CLARITY nev\u0171 elj\u00e1r\u00e1ssal v\u00e1laszoljanak. A r\u00e9szletes szerkezeti \u00e9s molekul\u00e1ris inform\u00e1ci\u00f3 kinyer\u00e9se egy intakt biol\u00f3giai rendszerb\u0151l az alapokt\u00f3l kezdve nagyon nagy kih\u00edv\u00e1snak tekinthet\u0151. A c\u00e9l hat\u00e9kony el\u00e9r\u00e9s\u00e9nek \u00e9rdek\u00e9ben t\u00f6bb ter\u00fclet technol\u00f3giai innov\u00e1ci\u00f3it kell alkalmazni. Az agy szerkezet\u00e9nek \u00e9s m\u0171k\u00f6d\u00e9s\u00e9nek tanulm\u00e1nyoz\u00e1sa, illetve a kett\u0151 egym\u00e1sra hat\u00e1s\u00e1nak vizsg\u00e1lata a mozgat\u00f3rug\u00f3ja az idegtudom\u00e1nyi kutat\u00e1soknak. Egy intakt szerv vagy sz\u00f6vet tanulm\u00e1nyoz\u00e1sa eddig el\u00e9g felsz\u00ednesen t\u00f6rt\u00e9nt, ugyanis amint beleavatkozunk m\u0171vi\/prepar\u00e1ci\u00f3s \u00faton az adott strukt\u00far\u00e1ba, a manipul\u00e1ci\u00f3 k\u00f6vetkezt\u00e9ben n\u00e9mi v\u00e1ltoz\u00e1st id\u00e9z\u00fcnk el\u0151. Ez\u00e9rt is korszakalkot\u00f3 megold\u00e1s az intakt szervvel vagy sz\u00f6vettel k\u00eds\u00e9rletek sz\u00e1moss\u00e1ga, s v\u00e9gs\u0151 soron a transzparens sz\u00f6vet technol\u00f3giai kialak\u00edt\u00e1sa. R\u00f6viden \u00e9s szakmaian megfogalmazva ez egy olyan elj\u00e1r\u00e1s, ahol az intakt sz\u00f6vetet \u00e1talak\u00edtj\u00e1k egy nanop\u00f3rusos hidrog\u00e9l-hibridiz\u00e1lt form\u00e1v\u00e1, amit h\u00e1rom dimenzi\u00f3ban keresztk\u00f6tnek hidrofil polimerekkel, amik teljes m\u00e9rt\u00e9kben \u00f6sszetartj\u00e1k a rendszert, s mindamellett optikailag transzparens (\u00e1tl\u00e1tsz\u00f3) \u00e9s a makromolekul\u00e1knak perme\u00e1bilis a k\u00f6zeg, azaz \u00e1tereszt\u0151. El\u0151sz\u00f6r eg\u00e9r agyakon demonstr\u00e1lt\u00e1k a m\u00f3dszert. Ily m\u00f3don egy \u00fajfajta intakt k\u00e9pet kaptak a hossz\u00fa neuron projekci\u00f3kr\u00f3l, a helyi neuron\u00e1lis k\u00f6r\u00f6k huzaloz\u00e1s\u00e1r\u00f3l, a sejt-sejt kapcsolatokr\u00f3l, s\u0151t m\u00e9g a sejt szintje alatti (szubcellul\u00e1ris) szerkezetekr\u0151l, feh\u00e9rje komplexekr\u0151l, aminosavakr\u00f3l \u00e9s inger\u00fclet\u00e1tviv\u0151 anyagokr\u00f3l (neurotranszmitterekr\u0151l). Ez az elj\u00e1r\u00e1s olyan szinten is bev\u00e1lt \u00e9s m\u0171k\u00f6dik, hogy a tov\u00e1bbra is intakt sz\u00f6veten lehets\u00e9ges tov\u00e1bbi elj\u00e1r\u00e1sokat is alkalmazni, mint p\u00e9ld\u00e1ul a cDNS vagy RNS jel\u00f6l\u00e9sen alapul\u00f3 in situ hibridiz\u00e1ci\u00f3 (ISH), az immunhisztok\u00e9miai fest\u00e9sek vagy a specifikus antitest jel\u00f6l\u00e9sek a sz\u00f6vet m\u00e9ly\u00e9n. S ezt tov\u00e1bb tet\u00e9zve lehets\u00e9gess\u00e9 v\u00e1lt, a param\u00e9terek megv\u00e1ltoztat\u00e1s\u00e1val a klinikai alkalmaz\u00e1s is, ahol hum\u00e1n agysz\u00f6veti mint\u00e1kon v\u00e9geznek szerkezeti elemz\u00e9seket. Ezeket a nem-metszett sz\u00f6veteket term\u00e9szetesen patol\u00f3gi\u00e1s k\u00f6r\u00fclm\u00e9nyek k\u00f6z\u00f6tt vizsg\u00e1lj\u00e1k neurol\u00f3giai \u00e9s pszichi\u00e1triai mint\u00e1kon. A tanulm\u00e1ny m\u00e9g tov\u00e1bb ment, mint azt a szem engedheti, ugyanis az elj\u00e1r\u00e1s megengedte, hogy a molekul\u00e1ris szint\u0171 felbont\u00e1s \u00e9s k\u00e9palkot\u00e1s is m\u0171k\u00f6dhessen ezzel a met\u00f3dussal. Ez eddig egy el\u00e9rhetetlen c\u00e9lnak min\u0151s\u00fclt a biol\u00f3gi\u00e1ban. Az alkot\u00f3k m\u00e1r a kezdetekt\u0151l fogva t\u00f6rekedtek arra, hogy a gyors sz\u00f6vettranszform\u00e1ci\u00f3val a k\u00f6r\u00fclm\u00e9nyekhez k\u00e9pest meg\u0151rizz\u00e9k annak nat\u00edv form\u00e1j\u00e1t sejtszinten is. Tudom\u00e1sul vett\u00e9k azt a t\u00e9nyt, hogy a sejteket k\u00f6r\u00fclvev\u0151 lipid kett\u0151s r\u00e9teg (plazmamembr\u00e1n vagy Unit Membrane), ami k\u00e9miailag is kett\u0151s term\u00e9szet\u0171 a szerkez\u00e9b\u0151l ad\u00f3d\u00f3an optikailag a sejteket, sz\u00f6veteket nehezen hozz\u00e1f\u00e9rhet\u0151v\u00e9 teszik. Az alapfelt\u00e9telez\u00e9s az volt, hogy mi t\u00f6rt\u00e9nne akkor, ha ezt el lehetne t\u00e1vol\u00edtani roncsol\u00e1smentesen. Ilyen esetben a f\u00e9ny \u00e9s a makromolekul\u00e1k k\u00f6nnyed\u00e9n be tudn\u00e1nk jutni (penetr\u00e1lni) az intracellul\u00e1ris t\u00e9rbe. Az\u00e1ltal, hogy ezt a diff\u00fazi\u00f3s, fizikai g\u00e1tat elt\u0171ntett\u00e9k, lehet\u0151v\u00e9 v\u00e1lt egy h\u00e1romdimenzi\u00f3s k\u00e9palkot\u00e1s \u00e9s egy immunhisztok\u00e9miai elemz\u00e9s a sejtek sz\u00e9tv\u00e1laszt\u00e1sa n\u00e9lk\u00fcl. Azonban a sejtek sz\u00e1m\u00e1ra szerkezeti integrit\u00e1st biztos\u00edt\u00f3 membr\u00e1n elt\u00e1vol\u00edt\u00e1s\u00e1val a sejtekben l\u00e9v\u0151 biomolekul\u00e1k meg\u0151rz\u00e9se bizonytalann\u00e1 v\u00e1lik, ami a molekul\u00e1ris \u00e9s sejtes inform\u00e1ci\u00f3k elveszt\u00e9s\u00e9hez, makroszkopikus szinten pedig egy m\u00e9ly sz\u00f6veti k\u00e1rosod\u00e1shoz vezet. Ennek a megel\u0151z\u00e9se \u00e9rdek\u00e9ben el\u0151sz\u00f6r egy fizikai v\u00e1z sz\u00fcks\u00e9ges a sz\u00f6vet elemeinek megtart\u00e1s\u00e1hoz, illetve a biol\u00f3giai inform\u00e1ci\u00f3 meg\u0151rz\u00e9s\u00e9hez. Erre a kih\u00edv\u00e1sra v\u00e1lasz a CLARITY. Ez a sz\u00f3 egy bet\u0171sz\u00f3 (akron\u00edma), ami az eredeti, angol nyelv\u0171 v\u00e1ltozatb\u00f3l legink\u00e1bb \u00edgy ford\u00edthat\u00f3 le: tiszta, lipid-cser\u00e9lt akrilamid-hibridiz\u00e1lt, merev k\u00e9palkot\u00f3\/immunfesthet\u0151\/in situ hibridiz\u00e1lhat\u00f3 sz\u00f6veti-hidrog\u00e9l (Clear Lipid-exchanged Acrylamide-hybridized Rigid Imaging\/Immunostaining\/In situ hybridization-compatible Tissue-hYdrogel). B\u00e1r a megnevez\u00e9s nem fedi le teljes m\u00e9rt\u00e9kben a val\u00f3s\u00e1got, ugyanis a megfogalmaz\u00e1sban sz\u0171ken szerepelnek azok a befecskendezhet\u0151 elemek, amelyek igaz\u00e1b\u00f3l v\u00e1ltoztathat\u00f3k. Nem felt\u00e9tlen\u00fcl kell hidrog\u00e9l-monomer vagy nem sz\u00fcks\u00e9ges, hogy a rendszer akrilamid-alap\u00fa legyen. Tov\u00e1bb\u00e1 a befecskendezett komponensek tulajdons\u00e1gai k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 m\u00e9rt\u00e9k\u0171ek lehetnek a tisztas\u00e1gra (\u00e1tl\u00e1that\u00f3s\u00e1gra), a merevs\u00e9gre \u00e9s a makromolekula-permeabilit\u00e1sra vonatkoz\u00f3an.<\/p>\n

 <\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

Brainbow + CLARITY eg\u00e9r hippocampus\u00e1nak t\u00f6mbszelv\u00e9nye in silico analiz\u00e1l\u00e1sra k\u00e9szen<\/em><\/p>\n

A protokoll<\/strong><\/p>\n

M\u00e1ra m\u00e1r sz\u00e1mos, k\u00fcl\u00f6nf\u00e9le protokoll l\u00e9tezik a m\u00f3dszer sz\u00e9lesk\u00f6r\u0171 alkalmaz\u00e1s\u00e1b\u00f3l ad\u00f3d\u00f3an. Mindegyikben k\u00f6z\u00f6s az, hogy ugyanabb\u00f3l az alapb\u00f3l indult el. Mindenekel\u0151tt egy hidrog\u00e9l oldatot kell k\u00e9sz\u00edteni. Mell\u00e9kesen jegyzem meg, hogy ezzel a fogalommal az agr\u00e1riumban is tal\u00e1lkozhatunk, ugyanis a kereskedelmi forgalomban kaphat\u00f3 akrilamid polimert a term\u0151f\u00f6ld kisz\u00e1rad\u00e1s\u00e1nak megakad\u00e1lyoz\u00e1s\u00e1ra \u00e9s a n\u00f6v\u00e9nyek gy\u00f6kerei fel\u00e9 t\u00f6rt\u00e9n\u0151 nedvess\u00e9gk\u00f6zvet\u00edt\u0151k\u00e9nt haszn\u00e1lj\u00e1k el\u0151szeretettel. A teljess\u00e9g ig\u00e9nye n\u00e9lk\u00fcl a receptet csak fel\u00fcletesen, az anyagok ismertet\u00e9s\u00e9vel \u00e1br\u00e1zoln\u00e1m. Az oldat elk\u00e9sz\u00edt\u00e9s\u00e9hez k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 ar\u00e1ny\u00fa akrilamid \u00e9s bisz-akrilamid monomereket kell felhaszn\u00e1lni, amiket egy foszf\u00e1t-puffert (PBS) \u00e9s egy paraformaldehidet (PFA) tartalmaz\u00f3 oldatba kell keverni. V\u00e9gs\u0151 l\u00e9p\u00e9sk\u00e9nt hozz\u00e1 kell adni a rendszerhez egy \u00fagynevezett inici\u00e1tor (kataliz\u00e1tor) anyagot, amelynek az \u00f6sszet\u00e9tele term\u00e9szetesen a felhaszn\u00e1l\u00f3k sz\u00e1m\u00e1ra nem ismert. Emellett az oldat biztons\u00e1gi szab\u00e1lyoz\u00e1sa is meg\u00e9r egy mis\u00e9t, ugyanis a felhaszn\u00e1lt anyagok k\u00f6z\u00fcl a PFA irrit\u00e1ci\u00f3t \u00e9s \u00e9rz\u00e9kenys\u00e9get v\u00e1lt ki, de emellett egy r\u00e1kkelt\u0151l (karcinog\u00e9n) m\u00e9reg is. Az akrilamid egy er\u0151s idegm\u00e9reg (neurotoxin), ami szint\u00e9n karcinog\u00e9n \u00e9s l\u00e9gz\u0151szervi megbeteged\u00e9st, valamint b\u0151rirrit\u00e1ci\u00f3t okoz. A folyamat sor\u00e1n teh\u00e1t nagym\u00e9rt\u00e9kben kell \u00fcgyelni a biztons\u00e1gra z\u00e1rt \u00f6lt\u00f6zet \u00e9s maszk, illetve v\u00e9d\u0151szem\u00fcveg form\u00e1j\u00e1ban. Kis elrettent\u00e9s v\u00e9gett 2002-ben egy Sv\u00e9d kutat\u00e1s eredm\u00e9nyek\u00e9nt publik\u00e1lt\u00e1k, hogy akrilamid keletkezik minden sz\u00e9nhidr\u00e1ttartam\u00fa \u00e9telben, amit sok\u00e1ig magas, 150\u00b0C feletti h\u0151m\u00e9rs\u00e9kleten k\u00e9sz\u00edtenek \u00e9s\/vagy kezelnek. B\u00e1r ez esetben a karcinogenit\u00e1s t\u00e9nye vitatott mind a mai napig a Cancer Research UK munkat\u00e1rsai szerint. Ha k\u00e9szen van az oldat, ut\u00e1na lehet\u0151leg nagyon alacsony, 0\u00b0C alatti h\u0151m\u00e9rs\u00e9kleten kell tartani az oldatot, nehogy elinduljon a polimeriz\u00e1ci\u00f3. Egyes elj\u00e1r\u00e1sok alkalm\u00e1val egy szaponin nev\u0171 fel\u00fcletakt\u00edv glikozidot kevernek az oldathoz, hogy megk\u00f6nny\u00edts\u00e9k a diff\u00fazi\u00f3j\u00e1t a hidrog\u00e9l monomernek \u00e9s az inici\u00e1tornak a sz\u00f6vetbe. Ezt olyan esetekben alkalmazz\u00e1k, amikor egyszer\u0171en nincs lehet\u0151s\u00e9g egy nagyobb szervn\u00e9l (nem csak az agyn\u00e1l) p\u00e9ld\u00e1ul sz\u00edvbe juttatott (intracardialis) perf\u00fazi\u00f3ra. Ilyen eset a post-mortem hum\u00e1n agysz\u00f6vet vagy a zebrahal (Danio rerio<\/em>) eg\u00e9sz agya. Emellett a szaponin megr\u00f6vid\u00edti a hidrog\u00e9l monomer inkub\u00e1ci\u00f3s idej\u00e9t az elj\u00e1r\u00e1s sor\u00e1n. H\u00e1tul\u00fct\u0151je ennek a v\u00edzold\u00e9kony seg\u00e9dvegy\u00fcletnek, hogy a nem rutinos emberek kez\u00e9be az\u00e9rt nem aj\u00e1nlatos a haszn\u00e1lata, mert bubor\u00e9kok keletkeznek. Alapvet\u0151en olyan tulajdon\u00e1gai vannak a vegy\u00fcletnek vizes k\u00f6zegben, mint a szappannak. A neve \u00f6nmag\u00e1ban is besz\u00e9des, de ez alapvet\u0151en az \u00e9l\u0151vil\u00e1gr\u00f3l mint\u00e1zott dolog, ugyanis a Szappanfaf\u00e9l\u00e9k csal\u00e1dj\u00e1nak (Familia Sapindaceae<\/em>) tagjaiban fellelhet\u0151 ez a vegy\u00fclet. Mag\u00e1t a perf\u00fazi\u00f3s folyamatot is alacsony h\u0151m\u00e9rs\u00e9kleten kell elv\u00e9gezni, vagy ahogyan az eredeti sz\u00f6veg \u00edrja, j\u00e9gen , mert az a biztos. Az alacsony h\u0151m\u00e9rs\u00e9klet azt a c\u00e9lt is szolg\u00e1lja, hogy a vizes f\u00e1zis\u00fa rendszerek t\u00e9rfogata megn\u0151 \u00e9s \u00edgy a sz\u00f6vet effekt\u00edv t\u00e9rfogata is t\u00e1gul. Ez nagyon k\u00e9nyes folyamat, ez\u00e9rt indokolt a sok, k\u00f6r\u00fclm\u00e9nyes l\u00e9p\u00e9s. A k\u00f6vetkez\u0151 \u00e1llom\u00e1s a hidrog\u00e9l sz\u00f6vetbe \u00e1gyaz\u00e1sa. Ezt egy olyan f\u00fclk\u00e9ben kell elv\u00e9gezni, amelynek j\u00f3 a szell\u0151z\u00e9se \u00e9s az elsz\u00edv\u00f3 rendszere, ugyanis sok, az eg\u00e9szs\u00e9gre vesz\u00e9lyes anyag ill\u00e9kony \u00e9s a megfelel\u0151 \u00f6lt\u00f6z\u00e9k mellett \u00edgy is \u00fcgyelni kell a biztons\u00e1gra \u00e9s a rizik\u00f3faktorokat a lehet\u0151 legalacsonyabbra kell reduk\u00e1lni. Miel\u0151tt az anyagot belepenetr\u00e1ltatjuk a sz\u00f6vetbe, egy k\u00fapos cs\u0151be kell elhelyezni, amihez egy m\u0171anyag cs\u00f6vet \u00e9s egy v\u00e1kuum pump\u00e1t csatlakoztatunk, hogy elz\u00e1rjuk a g\u00e9lt a l\u00e9gk\u00f6ri oxig\u00e9nt\u0151l. Amint ez megt\u00f6rt\u00e9nt a benne l\u00e9v\u0151 leveg\u0151t ki kell cser\u00e9lni 100% nitrog\u00e9nre, ugyanis az oxig\u00e9n megakad\u00e1lyozza (jelent\u0151en cs\u00f6kkenti) a hidrog\u00e9l polimeriz\u00e1ci\u00f3t. Ha ez megt\u00f6rt\u00e9nt, akkor megkezd\u0151dik a prepar\u00e1tum \u00e1tmos\u00e1sa, amely el\u0151sz\u00f6r szobah\u0151m\u00e9rs\u00e9kleten, majd egyre nagyobb h\u0151fokon k\u00f6vetkezik be. P\u00e1r nap eltelt\u00e9vel a sz\u00f6vetet\/szervet egy speci\u00e1lis, erre kialak\u00edtott elektroforetikus tiszt\u00edt\u00f3 kamr\u00e1ba (X-CLARITY ETC Chamber) kell helyezni, ahol folyamatos meleg v\u00edz \u00e9s hidorg\u00e9l oldat kering, valamint a sz\u00f6vetbe sz\u00f6vett\u0151l f\u00fcgg\u0151en 10-60 V fesz\u00fclts\u00e9get vezet a g\u00e9p. P\u00e1r napot kell ebben a kamr\u00e1ban is elt\u00f6ltenie a majdnem k\u00e9sz objektumnak, majd a legv\u00e9g\u00e9n k\u00e9tszer \u00e1t kell mosni manu\u00e1lisan PBS-sel. Ha ez megt\u00f6rt\u00e9nt a prepar\u00e1tum k\u00e9szen \u00e1ll a k\u00e9palkot\u00e1sra. Az el\u0151k\u00e9sz\u00edt\u00e9s sor\u00e1n 2 nappal a felv\u00e9telek k\u00e9sz\u00edt\u00e9se el\u0151tt 80%-os glicerin oldatba kell helyezni az eg\u00e9sz mint\u00e1t. A f\u00e9nymikroszk\u00f3pos vizsg\u00e1lathoz k\u00e9sz\u00edtett mint\u00e1t nagyon k\u00f6r\u00fclm\u00e9nyesen vagy m\u00e1r az el\u0151re elk\u00e9sz\u00edtett \u00e9s megvehet\u0151 tart\u00f3ba helyezve k\u00e9szen is \u00e1ll a vizsg\u00e1latra.<\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

A CLARITY elj\u00e1r\u00e1s optogenetikai m\u00f3dszerekkel kombin\u00e1lva is t\u00f6k\u00e9letesen m\u0171k\u00f6dik.<\/em><\/p>\n

Egy\u00e9b felhaszn\u00e1l\u00e1s<\/strong><\/p>\n

Az alapkoncepci\u00f3 tov\u00e1bbfejleszt\u00e9se \u00e9s \u00e1tvari\u00e1l\u00e1sa sor\u00e1n sz\u00e1mos m\u00e1s, egy\u00e9b lehet\u0151s\u00e9get t\u00e1rt fel a CLARITY. Az in planta sz\u00f6veti transzparencia alapjair\u00f3l, s annak transzl\u00e1ci\u00f3s szerep\u00e9r\u0151l kor\u00e1bban a rovat vezet\u0151je, Kelemen Andrea \u00e9rtekezett A spen\u00f3t j\u00f3 (a) sz\u00edvnek<\/em><\/a> c\u00edmmel. A technik\u00e1t m\u00e1r olyan szintig fejlesztett\u00e9k, hogy 2015-ben a Scientific Reports c\u00edm\u0171 foly\u00f3iratban meg is jelent egy \u00f6n\u00e1ll\u00f3 cikk PEA-CLARITY c\u00edmmel, amelyben h\u00e1romdimenzi\u00f3s molekul\u00e1ris szint\u0171 k\u00e9palkot\u00e1st tettek lehet\u0151v\u00e9 a n\u00f6v\u00e9nyi szervezeten in toto. Ebben az esetben az eredeti protokollhoz k\u00e9pest annyival m\u00f3dos\u00edtott\u00e1k az \u00f6tletet, hogy a doh\u00e1nyban (Tobacco sp.<\/em>) \u00e9s a l\u00fadf\u00faben (Arabidopsis thaliana<\/em>) \u00fagynevezett Plant Enzyme-Assisted (PEA) m\u00f3dszerrel, enzimatikusan, de ugyan\u00fagy akrilamid-alap\u00fa rendszerrel \u00e9rtek el transzparenci\u00e1t. Az \u00e1llati \u00e9s a hum\u00e1n mint\u00e1kat kezel\u0151 kutat\u00f3k pedig klinikai szinten is igyekeztek kamatoztatni a technika \u00f6r\u00f6ks\u00e9g\u00e9t. Dr. Rajou Tomer<\/strong> \u00e9s Dr. Karl Deisseroth<\/strong> 2014-ben publik\u00e1lt\u00e1k le a Nature Protocols<\/em> c\u00edm\u0171 foly\u00f3iratban a COLM (CLARITY-Optimized Light Sheet Microscopy) nev\u0171 mikroszk\u00f3pos elj\u00e1r\u00e1st, ami alapvet\u0151en a k\u00f6zepes felbont\u00e1s\u00fa, \u00e1mde ann\u00e1l gyorsabb \u00e9s hat\u00e9konyabb optikai szeletel\u0151 k\u00e9pess\u00e9ggel b\u00edr\u00f3 Light-Sheet Fluorescent Microscopy (LSFM) technik\u00e1n nyugszik. \u00c9rdekess\u00e9g, hogy a szerz\u0151 Deisseroth volt az egyik szem\u00e9ly, aki felfedezte \u00e9s le\u00edrta a CLARITY-t. 2016-ban pedig a m\u00fcncheni Ludwig Maximilians Egyetem kutat\u00f3inak siker\u00fclt el\u00e9rni azt az \u00fajabb m\u00e9rf\u00f6ldk\u00f6vet, ami sor\u00e1n egy kiseml\u0151s eg\u00e9sz test\u00e9t siker\u00fclt lek\u00e9pezni egy hasonl\u00f3 m\u00f3dszerrel, amit uDISCOnak neveztek el (Ultimate 3D-imaging of solvent-cleared organs). S hogy ezt m\u00e9g hova lehet fokozni? Nos, a v\u00e1lasznak csak a fant\u00e1zi\u00e1nk szabhat hat\u00e1rt. Soraim z\u00e1r\u00e1sak\u00e9pp pedig meg szeretn\u00e9m osztani\u00a0 kedves Olvas\u00f3kkal Dr. Francis Sellers Collins<\/strong>, amerikai orvos-genetikus \u00e9s a marylandi Nemzeti Eg\u00e9szs\u00e9g\u00fcgyi Int\u00e9zetek (National Institutes of Health; NIH) igazgat\u00f3j\u00e1nak 2013-as Az agy: Most l\u00e1tsz, nemsok\u00e1ra nem fogsz<\/em> (The Brain: Now You See It, Soon You\u00a0Won\u2019t<\/em>) c\u00edm\u0171 \u00edr\u00e1s\u00e1ban megfogalmazott gondolatait, amelyet a felfedez\u00e9st k\u00f6vet\u0151en jegyzett le:<\/p>\n

\u201eA CLARITY hatalmas felfedez\u00e9s. Ennek seg\u00edts\u00e9g\u00e9vel a kutat\u00f3k k\u00e9pesek tanulm\u00e1nyozni a neurol\u00f3giai betegs\u00e9geket \u00e9s rendelleness\u00e9geket, a beteg vagy s\u00e9r\u00fclt r\u00e9szekre f\u00f3kusz\u00e1lva an\u00e9lk\u00fcl, hogy elt\u0171nne a glob\u00e1lis perspekt\u00edva. Ez valami olyasmi, ami sosem volt el\u00e9rhet\u0151 h\u00e1rom dimenzi\u00f3ban azel\u0151tt\u201d.<\/p><\/blockquote>\n

Forr\u00e1s:<\/p>\n

Chung, K., et al. (2013). Structural and molecular interrogation of intact biological systems. Naturehttp:\/\/www.cancerresearchuk.org\/
\n<\/em>http:\/\/hydrogel.hu\/
\n<\/em>http:\/\/clarityresourcecenter.org\/
\n<\/em>Palmer, W. M., et al. (2015). PEA-CLARITY: 3D molecular imaging of whole plant organs. Scientific reports,Tomer, R., et al.. (2014). Advanced CLARITY for rapid and high-resolution imaging of intact tissues. Nature protocols
\n<\/em>Pan, C.,et al. (2016). Shrinkage-mediated imaging of entire organs and organisms using uDISCO. Nature Methods.<\/em><\/p>\n

 <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

A sz\u00f6vetek b\u00e1mulatos transzparenci\u00e1ja<\/p>\n","protected":false},"author":59,"featured_media":2672,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[1,56],"tags":[312,723,73],"class_list":["post-2667","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-foldal","category-ttt","tag-biologia","tag-clarity","tag-ttt"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/2667"}],"collection":[{"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/59"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=2667"}],"version-history":[{"count":4,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/2667\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":2669,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/2667\/revisions\/2669"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/media\/2672"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=2667"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcategories&post=2667"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/nyuz.elte.hu\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Ftags&post=2667"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}